LAPORAN PRAKTIKUM
PRAKTIKUM ANALISIS BAHAN BIOLOGI
PENGUKURAN KADAR KOLESTEROL
(Metode Lieberman - Burchards)
Disusun Oleh :
Nama : Hendy Vidiana
Nim : 08308144009
Prodi : BIOLOGI /E
JURUSAN PENDIDIKAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS NEGERI YOGYAKARTA
2011
BAB I
PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG
Kolesterol adalah zat lemak yang sangat penting dalam pembentukan dinding sel pada tubuh manusia dan hewan. Dua sumber utama kolesterol dalam darah diperoleh daripada pemakanan dan pengeluaran hati. Kolesterol juga ditemukan beredar dalam sirkulasi darah manusia. Kolesterol yang terdapat dalam tubuh manusia berasal dari dua sumber utama yaitu dari makanan yang dikonsumsi dan dari pembentukan oleh hati. Kolesterol yang berasal dari makanan terutama terdapat pada daging, unggas, ikan dan produk olahan susu. Jeroan daging seperti hati sangat tinggi kandungan kolesterolnya, sedangkan makanan yang berasal dari tumbuhan justru tidak mengandung kolesterol sama sekali. Setelah makan, kolesterol akan diserap oleh usus halus untuk selanjutnya masuk ke sirkulasi darah dan disimpan dalam suatu mantel protein.
Untuk mengetahui kandungan kolesterol dalam berbagai bahan makanan, dapat dilakukan dengan menggunakan berbagai metode pengukuran baik secara kualitatif maupun kuantitatif dari metode yang sederhana sampai metode yang kompleks. Tentu saja memiliki kelebihan dan kekurangan. Oleh karena itu dalam praktikum kali ini menggunakan pengukuran kadar kolesterol dengan menggunakan metode Lieberman-Burchards yang menggunakan alat spesifik berupa spektrofotometer.
B. RUMUSAN MASALAH
1. Bagaimana kadar kolesterol pada bahan makanan kuning telur dengan metode Lieberman Burchards?
2. Dari beberapa bahan makanan sampel pada praktikum, manakah sampel yang memiliki kadar kolesterol tertingi dan terendah?
C. TUJUAN
1. Untuk megetahui kadar kolesterol pada kuning telur dengan metode Lieberman-Burchards
2. Untuk mengetahui kadar kolesterol tertinggi dan terendah dari bahan makanan yang digunakan sebagai sampel pada praktikum
D. MANFAAT
1. Dapat memngetahui jumlah kadar kolesterol pada kuning telur
2. Mampu menambah pengetahuan tentang kadar kolesterol paling tinggi dan paling rendah pada bahan makanan
BAB III
METODE
A. Alat dan Bahan
Alat
1. Gelas kimia
2. Tabung sentrifuge
3. Tabung reaksi
4. Penggerus porselin (mortar)
5. Batang pengaduk
6. Pipet ukur
7. Kompor listrik
8. Sentrifuge
9. Timbangan analitik
10. Spektrofotometer
11. Tabung cuvet
12. Rak tabung reaksi
13. Filler
14. Waterbath
15. Vorteks
Bahan
1. Alkohol absolut
2. Aseton
3. Kloroform
4. Asam sulfat pekat
5. Asetat anhidrat
6. Sampel (hati, daging, otak, kuning telur dan kulit).
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
HASIL
Tabel 1. Absorban larutan kolesterol
No | Kadar kolesterol standar (mg/ml) | Absorban |
1 | 0.04 | 0.021 |
2 | 0.06 | 0.030 |
3 | 0.08 | 0.060 |
4 | 0.10 | 0.061 |
5 | 0.12 | 0.063 |
6 | 0.14 | 0.200 |
7 | 0.16 | 0.080 |
8 | 0.20 | 0.190 |
9 | 0.24 | 0.290 |
10 | 0.28 | 0.330 |
Tabel 2. nilai absorbansi kelompok
No | Kelompok | Sampel | Absorban |
1 | 1 | Telur | 0.035 |
2 | 2 | Kulit | 0.001 |
3 | 3 | Hati | 0.01 |
4 | 4 | Daging | 0.009 |
5 | 5 | Kulit | 0.062 |
6 | 6 | Telur | 0.023 |
7 | 7 | Otak | 0.008 |
8 | 8 | Hati | 0.01 |
9 | 9 | Daging | 0,012 |
Persamaan garis regresi (r) :
y.n = 1.327 x - 0.056
Kadar kolesterol (x) = y.n + 0.056
1.327
Dimana : x = kadar kolesterol
y = absorbansi
Perhitungan kadar kolesterol
1. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.035 x 60) + 0.056
1,327
= 1.625 mg/ml
2. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.001 x 10) + 0.056
1,327
= 0.0497 mg/ml
3. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.01 x 40) + 0.056
1,327
= 0.3436 mg/ml
4. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.09 x 10) + 0.056
1,327
= 0.7204 mg/ml
5. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.0062 x 10) + 0.056
1,327
= 0.0889 mg/ml
6. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.023 x 60) + 0.056
1,327
= 1.082 mg/ml
7. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.08 x 60) + 0.056
1,327
= 0.4039 mg/ml
8. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.01 x 10) + 0.056
1,327
= 0.1176 mg/ml
9. x = y.n + 0.056
1,327
= (0.012 x 10) + 0.056
1,327
= 0.1326 mg/mL
PEMBAHASAN
Pada praktikum penetapan kadar kolesterol digunakan sampel yang berupa otak ayam, kuning telur ayam, daging ayam, hati ayam dan kulit ayam. Tiap kelompok menghitung kadar kolesterol sesuai pembagian bahan yang ada. Kali ini kelompok 6 menggunahan sampel bahan makanan kuning telur ayam untuk dihitung kadar kolesterolnya dengan menggunakan metode Lieberman-Burchen. Adapun tujuan dari praktikum ini adalah Untuk megetahui kadar kolesterol dengan metode Lieberman - Burchards.
Kolesterol merupakan derifat dari lemak yang mempunyai cincin perhidrosiklopentano penatrean, kolesterol mempunyai rumus kimia C27H45OH. Kolesterol ini jika dilarutkan dalam air tidak akan larut, akan tetapi jika pada kloroform, ether, benzen, alkohol panas akan dapat larut.
Langkah pertama adalah membuat larutan larutan standar dengan kolesterol murni dengan konsentrasi 2 ml, sebanyak 10 ml dan diencerkan dengan 40 ml kloroform sehingga terbentuk larutan dengan konsentrasi 0,4 ml. Lalu larutan A diambil 20 ml dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambahkan kloroform 20 ml sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 0,2 ml yaitu larutan B. Kemudian larutan B ini diambil masing-masing 7 ml, 6 ml, 5 ml, 4 ml, 3 ml, dan 2 ml. dari pengenceran larutan B ini diperoleh larutan dengan konsentrasi 0,28; 0,24; 0,20; 0,16; 0,14; 0,12; 0,10; 0,08; 0,06; 0,04 mg/ml. Mengambil larutan A sebanyak 30 ml (larutan C). Larutan C tersebut diambil 7 ml, 6 ml, 5 ml, 4 ml masing-masing menjadi 0.28; 0.24; 0.20; dan 0.16 mg/ml. Masing-masing diambil 3 ml dan ditambahkan 3 ml asetat anhidrat dan asam sulfat dengan perbandingan 30:1. Diletakkan pada ruang gelap selama 5 menit hingga larutan tersebut berwarna hijau, lalu mengukur absorbansinya dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 680 nm.
Dari hasil absorban diperoleh dhasil yang kemudian dimasukan dalam grafik untuk memperoleh persamaan yang digunakan untuk menghitung kadar kolesterol untuk semua bahan makanan (sempel) yang digunakan dalam praktikum ini. Adapun perhitungan kadar kolesterol dengan rumus :
Persamaan garis regresi (r) :
Y = 2.355436 x + 0.00565
Kadar kolesterol (x) = y – 0.00565
2.355436
Dimana :
x = kadar kolesterol
y = absorban
Langkah kedua, adalah dengan menghitung kadar kolesterol masing- masing bahan dan dibandingkan. Dalam kerja penetapan kadar kolesterol ini, sample kuning telur ayam terlebih dahulu dilakukan penumbukan dengan menggunakan mortar agar diperoleh sampel yang benar-benar telah halus,. Sampel (kuning telur ayam) yang dibutuhkan sebanyak 1 mg, yang kemudian dicampur dengan aseton alkohol dengan perbandingan 1 : 1 dan diaduk. Setelah sampel tersebut dicampur dengan aseton dan alkohol maka akan terbentuk endapan. Agar didapatkan supernatan (bagian bening) maka, perlu dilakukan sentrifuge pada kecepatan 1750 rpm selama 15 menit. Setelah terbentuk supernatan maka dilakukan pemanasan dalam waterbath sampai terbentuk residu (pasta). Pengenceran yang dilakukan untuk setiap sampel tidak sama, misalnya pada sampel otak/telur perlu diencerkan sebanyak 60 kali, hati 40 kali, dan daging pengencerannya dilakukan sebanyk 10 kali. Untuk pengenceran pada sampel otak ayam dibutuhkan 1,9 ml kloroform, kemudian residu 0,1 ml ditambahkan 2 ml campuran asam sulfat pekat dan asetat anhidart dengan perbandingan 1 : 30. (homogenkan)
Larutan residu yang telah diencerkan lalu ditempatkan pada ruang gelap selama 5 menit hingga terbentuk warna hijau. Hasil warna yang diperoleh kemudian dibaca dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 680 nm. Selanjutnya membuat larutan blanko yang berisi 2 ml kloroform dan 2 ml campuran asam sulfat pekat dan asetat anhidrat (1:30).
Dari hasil perhitungan diperoleh nilai untuk masing-masing sampel yaitu :
- Sampel kuning telur kelompok 1: 1.625 mg/ml
- Sampel kuning telur kelompok 6: 1,082 mg/ml
- Sampel hati (kelompok 3 dan 8) 0,3436 mg/ml dan 0,1176 mg/ml
- Sampel otak (kelompok 7) 0,4036 mg/ml
- Sampel daging (kelompok 4 dan 9) 0,7204 mg/ml dan 0,1326 mg/ml
- Sampel kulit (kelompok 2 dan 5) 0,0497 mg/ml dan 0,0889 mg/ml
Dari hasil perhitungan kadar kolesterol diperoleh hasil, sampel kuning telur kelompok 1 memiliki kadar sebesar 1.625 mg/ml, sampel kuning telur kelompok 6 memiliki kadar sebesar 1.082 mg/ml. Perbedaan kadar kolesterol pada bahan yang sama ini memungkinkan terjadi akibat beberapa faktor diantaranya adalah adanya perbedaan pada penimbangan pertama yang ukrannya ± 1 gram, selain itu pada saat menghomogenkan serta pada saat pembuatan pasta juga mempengaruhi kadar kolesterol setiap sampelnya. Perbedaan ruang dalam penggelaman selama 5 menit juga menjadi alasan lain. Kepekatan pasta mempengaruhi perubahan warna dan perhitungan pada spektrofotometer.
Dari hasil perhitungan kadar kolesterol diperoleh hasil, sampel kuning telur memiliki kadar sebesar 1.082 mg/ml. Kandungan kolesterol pada kuning telur ini masih termasuk kandungan kolesterol normal. Sebab biasanya dalam 1 gram kuning telur normal mengandung 4,62 mg/ml kolesterol. Pada kebanyakan kuning telur, kandungan kolesterol didalamnya lebih tinggi dibandingkan kadar kolesterol pada bahan makanan lainnya. Karena kolesterol 1 kuning telur setara dengan kolesterol 75 gram hati jeroan sapi / sekitar 213 mg/ml. Sehingga pada seseorang yang menderita kelebihan kolesterol harus sangat berhati – hati untuk mengkonsumsi kuning telur. Karena kebutuhan kolesterol tubuh hanya kurang dari 200 mg/ml.
Sedangkan sampel hati memiliki kadar sebesar 0,3436 mg/ml dan 0,1176 mg/ml, sampel otak memiliki kadar sebesar 0,4036 mg/ml, dan sampel daging memiliki kadar sebesar 7204 mg/ml dan 0,1326 mg/ml, dan sampel kulit memiliki kadar sebesar 0,0497 mg/ml dan 0,0889 mg/ml. Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa kadar koelsterol sampel otak lebih tinggi dibandingkan dengan sampel lainya (daging, kuning telur, kulit dan hati). Sedangkan kadar kolestrol sampel kulit paling rendah dibandingkan dengan sampel lainya (otak, daging, kuning telur dan hati). Hal ini disebabkan karena pada otak tersusun atas saraf – saraf yang strukturnya tersusun atas stereol – stereol yang derivatnya berupa kolesterol. Sedamgkan kadar kolesterol paling rendah pada kulit sebab pada kulit hanya terdapat lemak primer, bukan berupa kolesterol.
Kolesterol banyak menumpuk pada pembuluh darah. Kolesterol yang berlebihan ini dapat menyebabkan beberapa penyakit, diantaranya apabila kadar kolesterol yang berlebihan di dalam darah merupakan penyebab utama dari penyakit jantung dan penyakit pembuluh darah. Kolesterol membentuk bekuan dan plak yang menyumbat arteri dan akhirnya memutusksn aliran darah ke jantung (menyebabkan serangan jantung) dan ke otak (menyebabkan stroke). Hal yang seperti ini dapat dicegah dengan selalu belajar hidup sehat, memakan makanan yang seimbang baik kandungan vitamin, mineral, karbohidrat, protein, lemak serta kolesterolnya. Selain itu harus diimbangi dengan olahraga rutin
BAB V
PENUTUP
KESIMPULAN
Dari praktikum pengukuran kadar kolesterol dengan metode Lieberman- Burchard diperoleh hasil untuk sampel
a. Sampel kuning telur kelompok 1 adalah 1.625 mg/ml
b. Sampel kuning telur kelompok 6 adalah 1,082 mg/ml
c. Sampel hati (kelompok 3 dan kelompok 8) adalah 0,3436 mg/ml dan 0,1176 mg/ml
d. Sampel otak (kelompok 7) adalah 4,036 mg/ml
e. Sampel daging (kelompok 4 dan kelompok 9) adalah 0,7204 mg/ml dan 0,1326 mg/ml
f. Sampel kulit (kelompok 2 dan kelompok 5) adalah 0,0497 mg/ml dan 0,0889 mg/ml
Dari sampel diatas yang memiliki nilai kadar kolesterol tertinggi adalah: pada sampel otak kulit yaitu: 0,0497 mg/ml dan 0,0889 mg/ml
DAFTAR PUSTAKA
Astuti. 2004. Petunjuk Praktikum Analisis Bahan Biologi. Yogyakarta: Jurdik Biologi FMIPA UNY
Harper. 1979. Biokimia. Jakarta : EGC press
Slamet, S.1997. Ilmu Gizi.Jakarta: Penerbit Dian Rakyat
Sudarmaji,dkk.1989.Analisis Bahan Makanan dan Pertanian.Yogyakarta : Penerbit Liberty Yogyakarta
Winarno,F.G. 1991. Kimia Pangan dan Gizi. PT. Gramedia Pustaka Utama : Yogyakarta .
